بررسی اثر هپاتوپروتکتیو فراکشن های مختلف میوه انار بر سلول های HepG2

فصل اول: مقدمه

-هدف و انگیزه

1ـ1ـ كبد

1ـ1ـ1ـ آناتومي.

2ـ1ـ1ـ بافت شناسي

3ـ1ـ1ـ فيزيولوژي و كاركردکبد

4ـ1ـ1ـ بيماري‌هاي كبد

1ـ4ـ1ـ1ـ هپاتيت سمي و هپاتيت ناشي از داروها

5-1-1- تتراکلریدکربن

1-5-1-1- مشخصات فيزيکى و شيميایي

2-5-1-1- مکانیسم سمیت تتراکلرید کربن.

3-5-1-1- علائم مسموميت با تتراکلرید کربن

6-1-1- آسيب‌هاي سلول كبدي

1-6-1-1- پراكسيداسيون چربي

2-6-1-1- قوانين شيمي ليپيدپراكسيداسيون

3-6-1-1- مراحل شروع و پيشرفت روند ليپيدپراكسيداسيون

4-6-1-1- سيستم حفاظتي سلول در برابر ليپيد پراكسيداسيون

5-6-1-1-تخليه گلوتاتيوني و استرس اكسيداتيو

6-6-1-1- اندازه گيري گلوتاتيون سلولي

7-1-1-آنزيم‌هاي آنتي اكسيدان.

1-7-1-1- سوپر اكسيد دسيموتاز

2-7-1-1- كاتالاز

3-7-1-1-گلوتاتيون پراكسيداز

8-1-1- سیلیمارین

1-8-1-1- ساختار سیلیمارین

2-8-1-1- مکانیسم عمل سیلیمارین

1-2-1- انار

2-2-1-انواع گونه های انار و پراکندگی آن.

1-2 -2-1- ترکیبات شیمیایی انار

3-2-1- کاربرد های درمانی انار

1-3-2-1- برگ درخت انار

2-3-2-1- پوست درخت انار

3-3-2-1- دانه انار

4-3-2-1-آب انار.

1-3-1- سلول های HepG2

2-3-1- سلول های سرطانی کبد Liver cell lines.

فصل دوم: مواد، دستگاهها  و روشها

1-2- مواد

2-2- دستگاه ها

3-2- وسايل.

4-2- روش ها

1-4-2-تهیه عصاره آب انار

2-1-4-2-استخراج عصاره هسته انار

3-1-4-2-تعیین غلظت سمی عصاره آب و هسته میوه انار

2-4-2-تهیه محلول استوک

5-2- روش تهيه محلولهاو بافرهاي مورداستفاده.

1-5-2- تهيه بافر فسفاته نمكي يا PBS (M 5/0 ,2/7pH=).

2-5-2- محلول 20٪ تري کلرو استيک اسيد.

3-5-2- محلول تيوباربيتوريك اسيد

4-5-2- محلول DTNB.

6-2- تهيه مواد لازم جهت کشت سلول

1-6-2- تهيه محلول استوك Trypsin  و رقيق سازي آن

2-6-2- تهيه محلول استوك Trypsin (0.25%) –EDTA (1mM)

3-6-2- محيط کشت

4-6-2- تهيه محيط كشت حاوي 10% سرم جنين گاو

5-6-2- تهيه محيط انجماد سلولها..

7-2- چگونگي کشت سلول

1-7-2- در آوردن سلولها از تانك نيتروژن مايع

2-7-2- تعويض محيط کشت

3-7-2- واکشت.

4-7-2- منحني رشد سلولها.

5-7-2- شمارش  سلولی و تعیین درصد سلولهاي زنده (Viability %) …

1-5-7-2- شمارش سلولي وتعيين درصدسلولهاي زنده(Viability %) با تریپان بلو

2-5-7-2- تعیین درصد سلول های زنده (%viability)به روشMTT

Assay

1-2-5-7-2- محاسبه تعداد مناسب سلول جهت انجام تست MTT..

2-2-5-7-2- تست MTT

6-7-2- آماده سازي سلولها و مراحل انجام آزمايش

7-7-2- تعيين درصد زنده بودن سلولها بعد از آزمايش.

8-7-2- تعيين ميزان ليپيد پراکسيداسيون..

8-2- تعيين ميزان گلوتاتيون

1-8-2- گلوتاتيون احياء.

2-8-2-گلوتاتيون تام.

3-8-2- رسم منحني استاندارد.

4-8-2- رسم منحني استاندارد گلوتاتيون

5-8-2- رسم منحني استاندارد ليپيد پراكسيداسيون

6-8-2-اندازه گیری ترکیبات فنولی.

7-8-2- محاسبات آماري

فصل سوم: نتايج

1-3- نتایج حاصل از آزمایشات انجام شده توسط تست MTT…

1-1-3- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف عصاره آب و هسته ی میوه انار بر رده سلولیHepG2  به روش MTT

2-1-3- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف CCl₄ بر رده سلولیHepG2  به روش MTT

3-1-3- بررسی اثر محافظتی غلظت های مختلف سیلیمارین در مقابل سمیت سلولی CCl₄

4-1-3- بررسی اثر عصاره های مختلف آب و هسته انار بر میزان ليپيد پراکسيداسيونGSSG ,  و GSH در سلول های 2HepG

5-1-3- اندازه گیری ترکیبات فنولی در عصاره های مختلف آب و هسته میوه انار

1-3- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl₄ بر سلول های HepG2.

 2-3- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl₄  بر سلول های HepG2.

3-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl₄  بر سلول های HepG2..

4-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی هسته میوه انار بر سمیت حاصل ازCCl₄  بر سلول های HepG2

5-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl₄  بر سلول های HepG2…

6-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl₄  بر سلول های HepG2.

7-3-مقایسه اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب و هسته میوه انار بر سلول های HepG2

فصل چهارم: بحث و نتيجه گيري

1-4-بحث و نتيجه گيري

فهرست منابع ومآخذ

نوع فایل:قالب بندی ورد

تعداد صفحات:88صفحه

اندازه فایل:1.50مگابایت

کبد یکی از ارگان های حیاتی بدن است که به علت نقش کلیدی آن در واکنش های متابولیکی و زدودن مواد سمی،همواره با مواد مختلف و ترکیبات حاصل از مسیرهای متابولیسمی گوناگون مواجه است که این مواد میتوانند بر کبد تاثیرات مخرب داشته باشند یکی از انواع مواد تتراکلرید کربن است.

تتراکلریدکربن در گذشته در پزشکی به طور وسیعی استفاده می شد اما شیوع مشکلات کلیوی و کبدی باعث عدم ادامه تجویز آن شد. اما هنوز در صنعت به کار می رود و همچنین این ماده یک مدل خوب برای مطالعات صدمات کبدی حاد است.

عصاره آب و هسته انار به عنوان مواد حاوی آنتی اکسیدان خاصیت محافظتی در برابر سموم و رادیکال های آزاد دارند. تحقیقات مختلف اثر محافظتی عصاره انار را در برابر سمیت کبدی داروها به اثبات رسانده است. در این تحقیق اثر عصاره آب و هسته انار در برابر سمیت تتراکلرید کربن مطالعه گردیده است.

1ـ1ـ كبد

1ـ1ـ1ـ آناتومي

كبد بزرگترين غده بدن مي‌باشد كه در قسمت فوقاني حفره شكمي نزديك به ديافراگم قرار دارد. قسمت اصلي كبد تحت پوشش دنده‌ها توسط ديافراگم و غضروفهاي دنده‌اي از پرده جنب، شش‌ها و پري كارديم قلب جدا مي‌شود. بعلت تماس سطح فوقاني كبد با سطح مقعر تحتاني پرده جنب اين سطح به شكل محدب درآمده است. كبد در تماس با قسمت شكمي مري، معده، دئودنوم و نيز در تماس با كليه راست و غده فوق كليوي، خميدگي راست كولون و كيسه صفرا مي‌باشد. كبد به دو لوب راست و چپ تقسيم مي‌شود. لوب راست بزرگتر از لوب چپ است. كيسه گلابي شكل صفرا به سطح پاييني لوب راست متصل است (1).