آنچه در پاورپوینت خالص سازي DNA از سلول‌هاي زنده خواهید دید

مقدمه

تکثیر  DNA با استفاده از Taq DNA  از تکنیک های مورد استفاده در زیست مولکولی و بیوتکنولوژی است.  DNA نقش مهمی در تکثیر ماده ژنتیکی موجود زنده است. اولین آنزیم  DNA پلیمر از توسط کوربندگ انجام شد. آنزیم به چهار گروه تقسیم شده           C- B- A آنزیم DNA  مقاوم به حرارت از اجزاء مهمی در  PCR است انواع نوترکیب یکی از آن  Hotstart است در دمای آزمایشگاه غیرفعال است. اتصال پرامیرها به محل غیر هدف است.

DNA  در میان طیف پروکاریوت قرار می گیرد. مقاوم به اشعه و مقاوم به حرارت و باکتری روده ای  Ecol و باکتری اجباری داخل سلول کلامید را شامل می شود. مزیت  TAPDNA تحمل درج حرارت بالا است.  قطعات  DNA می توان 10 هزار جفت باز را تکثیر کند. باعث افزایش  PCR در دمای بالا است. مناسب ترین دمای  75-800است. TAq رایج ترین آنزیم مقاوم به حرارت برای  PCR است. برای جداسازی آنزیم مقاوم به حرارت به عنوان مثال آنزیم PFU جزء خانواده B  پلیمراز است دارای فعالیت اگزونوکلئازی است. هدف تولید پروتئین نوترکیب است. از معایب این آنزیم پایداری حرارتی خیلی پایین است.

چکیده و هدف

آنزیم DNA  پلیمر از مقاوم به حرارت به علت کاربرد آن در PCR  و بیولوژی مولکولی توجه زیاد شده. هدف سنجش عملکرد تولید آنزیم  DNA حساس به سرما و مقاوم به حرارت است. در باکتری و خالص سازی سریع و ارزان آن است. بعد از سنترژن به صورت مصنوعی سپس پلاسمید حاوی ژن تولید کننده آنزیم  DNA به سویه E. ColIBl21 انتقال یافت. از  IPTG به عنوان القاء گر برای بیان ژن استفاده می شود فعال سازی آنزیم توسط امواج اولتراسوند و به وسیله شوک حرارتی در 0c 72 و رسوب دهی پروتئین های نامحلول و به وسیله سانتریوفوژ انجام می گردد.

Taq DNA مقاوم به حرارت و حساس به سرما نوترکیب بیان شده در  E. col برتری قابل توجه به عملکرد بهتری نسبت به آنزیم از نظر فعالیت و مقاوم در برابر حرارت است.

ژن تولید کننده آنزیم به محیط کشت  LB مایع حاوی آنتی بیوتیک به مدت 3 ساعت در دمای 0c 37 جهت بهینه شدن پروتئین القاء کننده  IPTG به محیط است به مدت 12 ساعت انکو به شده پس از القاء خالص سازی اولیه آنزیم توسط اولتراسوند و شکسته شدن دیواره سلول و شوک حرارتی در 0c 72 است.

کشت دادن باکتری ها و برداشت سلول ها

باکتری ها بدون مشکل زیادی در محیط کشت مایع رشد می کنند (کشت مایع). مخلوط متعادلی از مواد غذایی لازم برای رشد و تقسیم باکتری ها را با غلظت مناسب فراهم آورد. دو نوع محیط کشت معمولی.

محیط  M9 نمونه ای از یک محیط کشت مشخص است که تمام اجزا آن شناخته شده است.

عناصر ضروری مانند نیتروژن، منیزیم و کلسیم و همچنین گلوکز برای تامین کربن و انرژی است.

برای رشد باکتری ها باید عوامل رشدی مثل عناصر کمیاب و ویتامین ها به محیط اضافه شوند تا بتواند رشد باکتری ها را تامین کند.

دومین محیط کشت

 (LB) یک محیط کشت پیچیده یا نامشخص است، به این معنی که مقدار و نوع دقیق اجزا آن مشخص نیست، زیرا دو تا از مواد سازنده آن به نام تریپتون و عصاره مخمر، تریپتون، آمینواسیدها و پپتیدهای کوچک را فراهم می آورد، در حالی که عصاره مخمر نیتروژن و همچنین قندها و موادغذایی آلی و غیرآلی را تامین می کند.